Determinacion de azucares totales-Metodo fenol sulfurico

 

Materiales y equipo.

-Tubos de ensayo

-Embudo de vidrio

-Papel filtro

-Pipetas volumétricas

-Pipetas mohr

-Agitador

-Gradilla

-Centrifugadora

-Baño de hielo

-Espectrofotómetro UV-Visible

Reactivos.

-Solución de sulfato de Zinc 10%

-Solución de NaOH 0.5 N

-Solución de fenol 5%

-Acido Sulfúrico concentrado

-Solución patrón de carbohidrato



Procedimiento.

Desproteinización de las muestras.

-Pesar 2 g de muestra homogenizada y suspender en 20 mL agua desmineralizada. Homogenizar.

-Filtrar y tomar 10 mL del filtrado, a este adicionar 1 mL de una solución de Sulfato de Zinc al 10% y 1 mL de NaOH 0.5 N.

-Mantener en reposos durante 15 minutos y luego centrifugar a 200 rpm durante 15 minutos. Utilizar el sobrenadante para la cuantificación de azucares totales.

Determinación de Azucares Totales

NOTA. Realizar todo el procedimiento para un tubo antes de seguir con el siguiente.

-Preparar una solución o suspensión de la muestra en agua, procurando que los carbohidratos se encuentren en el intervalo de sensibilidad del método (10-100μg/mL).

-En tubos de ensayo perfectamente etiquetados, colocar 1 mL de la solución o suspensión acuosa de la muestra.

-Para cada tubo adicionar 0.6 mL de una solución acuosa de fenol al 5%. Mezclando perfectamente.

-Adicionar cuidadosamente 3.6 mL de ácido sulfúrico concentrado, homogeneizar.

-Dejar enfriar la mezcla a temperatura ambiente (aproximadamente 30 min.).

-Determinar la intensidad del color naranja obtenido en un espectrofotómetro a 490 nm, frente a un blanco preparado de la misma manera utilizando agua desmineralizada.

-Calcular la cantidad de carbohidratos presentes en la muestra a partir de una curva patrón preparada con el carbohidrato de interés en el intervalo del método, tratada de la misma manera que el problema.

 

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